Типы микроскопов флуоресценции

При микроскопы были изобретены около 1600 CE, натурфилософов обратили свои взоры на мир в мире. При Энтони ван Левенгук созданный небольшие, высоко-изогнутые линзы и механический держатель для регулировки вид, он открыл окно на микроскопическом мире бактерий, клетки крови, простейшие и клеточной структуры растений. Но на протяжении всей истории микроскопии, там всегда было один вопрос: Что это за странные вещи, замеченные через объектив? Флуоресцентная микроскопия относится к набору приемов, которые минимизирует что неопределенность - потому что в флуоресцентной микроскопии, когда свет сиял на образец, он сияет свой свет обратно. Эпифлуоресцентной

эпифлуоресцентной микроскопы блеск и собирать свет через те же оптики.

До сих пор наиболее распространенным флуоресцентный микроскоп является конфигурация эпифлуоресцентной. В эпифлуоресцентной микроскопом, источник света - как правило, ртуть или ксеноновая лампа - светит через фильтр, который выбирает узкую область длин волн. Фильтрованный свет светит на образец через объектив микроскопа. Входящий свет поглощается флуорофорами - молекулярных меток, которые испускают свет с длиной волны, когда они поглощают свет более коротких длин волн. Свет от флуорофорами, наряду с рассеянного света от источника освещения, идет обратно в объектив и детектор или глаз. Попутно еще блоки отфильтровать освещающего света, поэтому все, что осталось, это флуоресцентный свет от образца.
Каталог
конфокальной Каталог

эпифлуоресцентной микроскоп собирает свет от везде в поле зрения микроскопа. Некоторые из возбуждающего света поглощается до фокальной плоскости микроскопа, некоторые в фокальной плоскости, а некоторые за фокальной плоскости. Потому что микроскоп собирает все, что свет, изображение будет содержать четкое изображение света в фокусе, но он также будет иметь выход в фокусе свет из других регионов. Конфокальный микроскоп фиксирует, что при фокусировке лазерного пятна в той же плоскости, как микроскоп сфокусирован. Затем обскуры идет в перед детектором, где он блокирует весь свет, что исходит не от фокуса микроскопа. При сканировании образца, чистый трехмерное изображение объекта может быть получено.



МНОГОФОТОННЫХ

В флуоресцентным микроскопом свет исходит от молекул в образце.

В конфокальной микроскопии выравнивание очень чувствительна. Если лазерного пятна, объектив микроскопа, собирающие оптика и обскуры выключены даже малейшее количество производительности микроскоп страдает. Многофотонное микроскоп получает вокруг этой проблемы с помощью длины волны лазерного излучения, что только половина, как энергичный, как это должно быть, чтобы возбудить флуорофоров в образце. Единственный способ флуорофоры получите взволнован и излучают свечение, если лазерный луч достаточно яркий, так что две частицы света - фотоны - ударить флуорофора в очень короткое время. Это происходит только тогда, когда лазер фокусируют на очень маленьких месте. Так единственное место в образце, который будет излучать свет, где лазер фокусируется, который держит изображение красивым и чистым, потому что нет никаких дополнительных фоне света, чтобы избавиться от -. Что означает отсутствие крошечное отверстие для выравнивания Каталог

полного внутреннего отражения флуоресценции (TIRF)

один образец может иметь несколько флуорофоры.

Еще один способ получить очень чистые изображения, чтобы убедиться, свет возбуждения не получите очень далеко в образце. Если сгусток нейронов, например, помещают в каплю раствора на предметном стекле, то некоторые из нейронов будет прилипать к поверхности стекла. В общей внутренней флуоресцентной отражения (TIRF) микроскопии свет направлен в сторону в стекле, так что на самом деле не сделать это в раствор холдинга клетки. Но часть света едва просачивается в растворе - только в непосредственной близости от поверхности стекла. Это означает, что только места, которые будут испускают свет будет очень тонкой области вплотную к поверхности стекла. За то, как нейроны, где так много интересные вещи происходит на поверхности клеток, этот метод может быть очень эффективным
Каталог
Супер-Резолюция Каталог

Все микроскопы. - в том числе флуоресцентных микроскопов - ограничены физики, который регулирует распространение света. Одним из основных правил является то, что сфокусированного пятна света может получить только настолько мал, - и не меньше. Для видимого света, что размер составляет около 200 нанометров, или 200 миллиардных долей метра. Но отдельные молекулы находятся всего в нескольких нанометров, так что есть много интересных особенностей, которые ниже этого предела размера, называемых дифракционный предел. Ученые разрабатывают методы "супер-разрешения" красться вокруг этого предела. Истощение выбросов Структурированное освещение микроскопии (SIM), и стимулировали (STED) микроскопии, например, оба флуоресценции методы микроскопии, которые ограничивают размер светоизлучающего месте, уменьшая размер возбуждающего света месте. Каталог
< ш> Каталог